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C18色谱柱的常见问题攻略
点击次数:171 发布时间:2018-04-17
   C18色谱柱的常见问题攻略
  1.色谱柱的活化及应用
  C18色谱柱在生物化学分析工作中应用的zui为广泛。新色谱柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新色谱柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单,多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定,再进行正式进样测定。
  如果要加快平衡时间,把前面用来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成,连续进样多针。用待测物对新色谱柱平衡,目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
  2.色谱柱的清洗和保护
  C18色谱柱柱头污染了,就取出污染的,再装一些填料。因为加入你刮了些填料,那么微观的塔板数就少了。假如你刮得不多,仅表面,可能就是一些脏物,所以问题解决。但是今后还会有同样问题,再刮或不小心刮,可能会影响柱效。建议还是装一个预柱。
  如果色谱柱柱子取下来放置一段时间,对一般的反相色谱柱,也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵头塞紧色谱柱两头,以免保存溶剂挥发,应该不需要做特殊的保护。
  3.色谱柱柱效的恢复
  在进酸性样品时,很伤柱子,如使用一段时间后,色谱柱柱效降低,峰形改变,如何恢复呢?
  色谱柱测酸性样品,应该是用氨基色谱柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在色谱柱柱效下降。
  建议:用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱,之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。
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